Способы и средства, рекомендуемые для обеззараживания объектов при сибирской язве

При проведении обеззараживания от возбудителя сибирской язвы необходимо учитывать высокую устойчивость спор.

Наиболее эффективными для обеззараживания объектов и предметов, зараженных спорами сибирской язвы, считаются следующие способы и средства:

• а) сжигание на огне;
• б) водяной пар температурой не ниже 110 °C (в паровых камерах);
• в) кипячение в воде при 100 °C и выше (лучше с добавлением 1-2% питьевой соды) в течение 1 ч в закрытом сосуде (с узким отверстием в крышке для выхода пара);
• г) увлажненный горячий воздух;
• д) 20%-й осветленный и неосветленный раствор, приготовленный из хлорной извести, содержащей не менее 25% активного хлора;
• е) 1-4%-е активированные растворы хлорамина или препарата «ХБ», содержащие 1% активного хлора и 1% сернокислого, хлористого или азотнокислого аммония или 0,125% аммиака (активаторы вносятся в раствор после растворения хлорамина);
• ж) 10%-й раствор едкого натра при температуре 60-70 °C;
• з) 2,0-5%-й раствор формальдегида (6,25 и 12,5%-е растворы 40%-го формалина) при температуре не ниже 40 °C, лучше с 0,5% мыла;
• и) 15%-й осветленный и неосветленный раствор двутретиоснов-ной соли гипохлорита кальция;
• к) 4%-й осветленный раствор хлорной извести при 2%-м растворе двутретиосновной соли гипохлорита кальция, активированные хлористым или сернокислым аммонием, или аммиаком;
• л) 3-6%-е растворы перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс», при температуре растворов 50 °C и 20 °C соответственно;
• м) 10-15%-е растворы перекиси водорода;

• н) 5%-й однохлористый йод;
• о) окись этилена;
• п) бромистый метил.

Непригодными для дезинфекции при сибирской язве считаются растворы фенола, крезола и препараты, приготовленные из них, а также известковое молоко.

Лабораторные методы исследования на сибирскую язву

В постановке диагноза на сибирскую язву решающее значение имеют лабораторные исследования, поскольку болезнь довольно часто может протекать молниеносно, без характерных признаков септического процесса, или атипично, т. е. без характерных клинических признаков и патолого-анатомических изменений. Лабораторные исследования проводят с диагностической целью как при жизни животного (кроме свиней), так и посмертно. Поэтому в случае подозрения на сибирскую язву в лабораторию направляют строго определенный материал. Кроме того, при вынужденном подворном убое животного лабораторные исследования мяса на сибирскую язву являются обязательными.

В ветеринарных лабораториях, в зависимости от их оснащенности, могут быть проведены следующие исследования: микроскопия мазков, бактериологические исследования с целью выделения чистых культур возбудителя и изучения их свойств, идентификация выделенных культур по культурально-биохимическим свойствам, биопроба на лабораторных животных, серологические исследования разными методами.

При микроскопическом исследовании первичных мазков крови или патматериала предварительное заключение сообщают в хозяйство в течение суток, а затем после бактериологического исследования — в течение 3 дней. Окончательный диагноз ставят по результатам биологической пробы не позже 10 дней со дня получения патологического материала. В условиях мясокомбината исследования продуктов убоя бактериоскопией должны быть выполнены в течение двух часов.

Диагноз на сибирскую язву считается установленным при получении одного из следующих показателей:

• — выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы, и ги бели хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой с последующим выделением ее из органов павшего животного;
• — отсутствие в посевах исходного материала роста культуры, но гибели хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных и выделение из его органов культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы;
• — обнаружение типичных капсульных микроорганизмов в мазках из исходного патологического материала и получение положительных результатов методом иммунофлюоресценции с адсорбированной сибиреязвенной сывороткой;
• — положительная реакция преципитации при исследовании патологического материала или шкур;
• — положительный результат исследования материала другими серологическими методами.

Однако следует иметь в виду, что отдельные лабораторные методы не всегда дают точный результат. Например, Ю. И. Бойко, С. А. Лав-рунова (1978) исследовали 13 туш крупного рогатого скота, зараженных сибирской язвой в эксперименте. У всех животных были выявлены характерные для сибирской язвы клинические и патологоанатомические изменения. Однако при микроскопии мазков из органов и тканей бациллы не обнаружили. Реакция преципитации с вытяжками из тканей органов после выдерживания их в термостате была сомнительной или отрицательной. Бактериологическими и биологическими исследованиями органов и тканей был выявлен возбудитель сибирской язвы у 9 туш, а остальные туши дали отрицательный результат лабораторного анализа. Это указывает на необходимость проводить комплекс диагностических лабораторных исследований. Кроме того, в природе существует ряд аэробных споровых сибиреязвенноподобных сапрофитных видов микроорганизмов, так называемых антракоидов. Они по морфологическим и культуральным признакам во многом сходны с бациллой сибирской язвы, поэтому при лабораторных исследованиях возникает необходимость решить вопрос, выделена ли культура возбудителя сибирской язвы или подобного ему сапрофитного микроорганизма.

К главным дифференцирующим признакам возбудителя сибирской язвы относят: патогенность, капсулообразование, положительный тест «жемчужного ожерелья», флуоресцентный тест. Дополнительными признаками возбудителя болезни являются: неподвиж ность, отсутствие гемолиза, лецитиназная активность, образование фосфатазы.

Исследования многих авторов показали, что при дифференциации сибиреязвенных бацилл от антракоидов не следует использовать такие критерии, как рост в желатине, сахаролитические и редуцирующие свойства, признак подвижности, а в некоторых случаях и патогенность, так как они могут быть сходны. Тем не менее, так называемые антракоиды или ложно сибиреязвенные бациллы имеют ряд своих отличительных особенностей. В эту группу включены микробы, культурально и морфологически весьма сходные с истинной сибиреязвенной палочкой, но они более крупные, обладающие подвижностью и сильными гемолитическими свойствами, не способные к образованию капсул. Споры антракоидов большей величины, колонии менее правильные. Вирулентность антракоидов исчезает при пересевах на искусственных питательных средах. Способность к преципитации проявляется слабее, чем у сибиреязвенных микробов (в разведении 1:20 вместо 1:100).

Следует учитывать, что и лабораторные исследования не всегда дают точный результат. Это в первую очередь относится к диагностике атипичных форм болезни у всех видов сельскохозяйственных животных и особенно у свиней. По мнению ряда исследователей, выделить чистую культуру Вас. anthracis от свиней представляет определенные трудности. При высевах часто изолируют постороннюю микрофлору, задерживающую рост бацилл сибирской язвы и ослабляющую ее вирулентность. Лабораторные животные в таких случаях часто погибают не на 2-3-й дни, а через 3-4 недели. При микроскопии первичных мазков нередко обнаруживают морфологически измененные сибиреязвенные палочки.

Отмечено, что заражение лабораторных животных материалом от свиней дает положительный результат на сибирскую язву только в 14% случаев, реакция преципитации — в 93%, микроскопия — в 80%, бактериологическое исследование — в 55%. Это объясняется тем, что сибиреязвенные бациллы в патологическом материале сохраняются недолго. Если растереть селезенку и смешать ее с гниющей кровью, то уже через час нельзя обнаружить сибиреязвенных бацилл. Поэтому для правильной диагностики рекомендуется в каждом случае из подозрительных на сибирскую язву лимфатических узлов свиней заражать суспензией от 20 до 30 мышей, принимая во внимание при этом, что у свиней могут быть различные по вирулентности штаммы. Наблюдение за лабораторными животными следует вести 10-20 дней. Считается, что выделить возбудителя сибирской язвы из студенистого инфильтрата можно только через 4-10 ч после заражения животного.

Наблюдаются случаи, когда при высеве из пораженных лимфатических узлов на скошенном МПА на вторые сутки появлялся рост отдельных, влажных колоний в виде легкой паутины серовато-белого цвета. При микроскопическом исследовании мазков из этих колоний устанавливали одиночные и расположенные парами палочки, а также их скопления в виде глыб. При пересеве данных колоний на другие питательные среды и выдерживании посевов в термостате в течение 3-5 суток отмечали рост большого числа колоний. В мазках из этих колоний удавалось установить длинные грамположительные сибиреязвенные бациллы.

Иногда в первичных мазках из подчелюстных лимфатических узлов и посевов на МПБ обнаруживаются пастереллы и другие микробы. В таких случаях в МПБ в первые же сутки отмечают рост обеих культур. При дальнейшем выдерживании МПБ в термостате до 5 суток может наступить лизис сибиреязвенных бацилл при усиленном росте пастерелл. Поэтому целесообразно из суточной бульонной культуры высевы производить на твердые питательные среды (кровяной агар) для выращивания изолированных сибиреязвенных колоний с последующим заражением лабораторных животных.

При посеве на питательные среды с кровяным агаром даже при усиленном росте посторонней микрофлоры обычно все же удается вырастить изолированные сибиреязвенные колонии, которые в последующем нетрудно пересеять на МПБ и использовать для заражения лабораторных животных.

Из загнившего материала надо делать высевы на несколько чашек Петри с кровяным агаром. Выросшие отдельные сибиреязвенные колонии среди многочисленной банальной микрофлоры с помощью иглы отсевают в МПБ и помещают в термостат. Затем выросшей в бульоне культурой заражают лабораторных животных. При нехарактерном росте колоний на агаре делают пересев полученной культуры на агар Эндо с добавлениями 10% пептона. При росте возбудителя сибирской язвы, в отличие от антракоидов, покраснения среды не отмечают.

Оставшиеся кусочки патологического материала помещают в ступку и растирают вместе с физиологическим раствором. Приго товленную суспензию выдерживают при комнатной температуре 2-3 ч и заражают лабораторных животных (белые мыши, морские свинки) в дозе 0,1-0,5 мл в зависимости от степени поражения исходного материала. За лабораторными животными наблюдают в течение 10-20 дней. При этом учитывают, что при посевах на питательные среды споры для лабораторных животных становятся менее вирулентными.

Одновременно можно получать атипичные штаммы возбудителя сибирской язвы (лизирующие эритроциты, вызывающие помутнение бульона, и др.). Это довольно часто наблюдают при выделении возбудителя из подчелюстных лимфатических узлов у свиней.

Степень морфологических изменений возбудителя зависит от длительности пребывания его в организме животного. В первые дни болезни из очага поражения выделяются недиссоциированные микробы, затем они выделяются в овальной форме. Иногда встречаются колонии с незначительной узорчатостью или в виде редкой паутины — эрозивные формы.