Правила взятия образца крови для тестирования резистентности

Читатель хорошо помнит, что после отмены терапии устойчивые варианты вируса могут «исчезать». В действительности все устойчивые формы ВИЧ сохраняются в «архиве», однако, составляя небольшую часть популяции, перестают выявляться стандартными методами генотипирования. Время, в течение которого это происходит, сильно варьирует у разных пациентов, однако минимальные сроки очень невелики и могут составить 2-4 недели. Именно такой срок указан во всех руководствах в качестве максимального периода после прерывания неуспешной терапии, в течение которого следует взять анализ крови на генотип ВИЧ(АМ). Тем не менее, оптимальной по-прежнему остается рекомендация о назначении анализа генотипа на фоне продолжения терапии, сопровождающейся вирусологическим неуспехом. В идеале, лучше всего дождаться результата генотипирования и на основании его результатов в случае необходимости произвести замену схему терапии.

Часто на генотипирование направляют тот же образец, в котором получена повторно детектируемая вирусная нагрузка. Если этот образец не сохранился, следует представить в лабораторию данные о самом последнем результате определения ВН, а если эти данные были получены ранее 30 дней до постановки генотипирования, анализ ВН необходимо повторить.

Вирусная нагрузка в образцах, направляемых на генотипирование, часто бывает невысокой, поэтому особенно важно направить усилия на сохранение РНК в образце. Гепа- ринизированая плазма непригодна для этого вида анализа, для сбора крови используются только ЭДТА- пробирки, которые содержат хелатирующий агент, предотвращающий активность РНКаз-ферментов, которые разрушают РНК. По этой же причине после взятия образца крови плазму как можно быстрее (не дольше 2 часов) нужно отделить от клеток крови путем центрифугирования. Если по каким-либо причинам это нельзя сделать немедленно, следует до центрифугирования хранить кровь при комнатной температуре, чтобы избежать холодового гемолиза.

Аликвоты плазмы крови в объеме 1 мл помещают в несколько пробирок и хранят в холодильнике не больше 12 часов, если анализ производят в тот же день, либо замораживают на -70°С для более длительного хранения; срок его может составлять несколько лет. Транспортировать такие пробы следует в сухом льду.

Исследования последних лет, посвященные анализу возможности использования «сухой капли» (dry blood spots, DBS) для генотипирования ВИЧ позволили сделать однозначный вывод о том, что такой способ забора и хранения образцов вируса вполне себя оправдывает и может быть рекомендован к применению в регионах, отдаленных от специализированных лабораторий. Наибольшая результативность была получена в сухих образцах крови, где лучше сохранялся вирус, однако расхождений результатов в образцах крови и плазмы не было. ВОЗ рекомендует в странах с ограниченными ресурсами использовать «сухую каплю» крови, российские рекомендации пока этой темы не касаются.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ   След >